بهینه سازی تاخوردگی مجدد پروتئین آلفا آمیلاز حاصل از باکتری باسیلوس مگاتریوم و بررسی ویژگی آنزیم

دراین تحقیق مطالعاتی در مورد تاخوردگی مجدد پروتئین آلفا آمیلازbmw بدون سیگنال انجام شد و در نهایت شرایط تاخوردن پروتئین و فاکتورهای موثر بدست آمده از آزمایشات، توسط نرم افزارexpreimental design نوع 8 بهینه سازی شد. بهترین بازده تاخوردگی مجدد آنزیم با بافر تریس حاوی گلیسرول 20%، کلسیم 25 میلی مولار و غلظت آنزیم 3/0 mg/ml بدست آمد. دراین تحقیق نوع آلفا آمیلازbmw و ویژگی سوبسترایی و محصولات تولید شده توسط آن با کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا مورد بررسی قرارگرفت. نتایج نشان داد که این آنزیم دارای ویژگی سوبسترایی گسترده می باشد. درصد هیدرولیز سوبستراهای مختلف در مقایسه با هیدرولیز نشاسته در مورد سوبستراهای نشاسته، آمیلوز، آمیلوپکتین و پلولان به ترتیب 100، 130، 69، 26 است علاوه بر این، فعالیت هیدرولازی بر روی آلفا سیکلودکسترین ویژگی سوبسترایی دیگر این آنزیم منحصر به فرد است. به دلیل توانایی در شکستن هر دو پیوند آلفا 4 و1 و آلفا 6 و1 ، اصلی ترین محصول واکنش آنزیمی در مورد تمامی سوبستراها گلوکز می باشد. در ادامه به منظور بررسی در ویژگی سوبسترایی آنزیم مطالعات جهش زایی در ناحیه حفظ شده پنجم انجام شد.. آلفا آمیلازbmw در این ناحیه حفظ شده دارای توالی mpdln می باشد. آنزیم هایی که دارای این توالی هستند دارای ویژگی سوبسترایی گسترده می باشد. علاوه بر این آنزیم های گروه نئوپلولانازی که قادر به هیدرولیز پلولان و آلفا سیکلودکسترین هستند در این ناحیه حفظ شده دارای توالی mpkln می باشند. همچنین آنزیم های گروه الیگو-1و6-گلوگوزیداز در این ناحیه دارای توالی qpdln می باشند. این آنزیم ها توانا به هیدرولیز نشاسته و اولیگوساکاریدهای کوچک وتولید گلوکز هستند. بدین ترتیب جهش های m201q و d203k طراحی شدند و به انجام رسیدند. در مورد هر دو جهش یافته پارامترهای سینتیکی آنزیم هم تحت تأثیر قرار گرفت و ویژگی سوبسترایی آنزیم تغییر کرد.